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蛋白质的等电点在线播放_尿蛋白2+最快恢复(2024年12月免费观看)

内容来源：天津万源聚所属栏目：导读更新日期：2024-12-02

蛋白质的等电点

西南大学考研834：氨基酸要点 𐟌Ÿ 第三章：氨基酸 𐟓Œ 考点一：蛋白质的水解判断题：蛋白质的酸、碱水解不能完全得到20种蛋白质。有些蛋白质会被水解破坏，需要掌握这一点。 𐟓Œ 考点二：a-氨基酸的一般结构判断题：除甘氨酸外，其他氨基酸都有手性碳和旋光性；除脯氨酸外，其他氨基酸都是a-氨基酸，且都是L型。 𐟓Œ 考点三：氨基酸的分类组成蛋白质的20种常见氨基酸：三字母符号必须记住，虽然不会直接考察，但题目中出现的氨基酸都是三字母符号形式。酸性氨基酸（带负电）、碱性氨基酸（带正电）的类型。芳香族氨基酸的类型及其最大吸收波长。含羟基、含硫氨基酸的类型。生酮、生糖氨基酸的类型。必需氨基酸的类型，成人有8种，婴儿有9种。不参与转氨基酸的氨基酸类型。提供一碳单位的氨基酸类型。含氮最多的氨基酸、部分正电的氨基酸类型。某些氨基酸是活性物质前体。不常见氨基酸：羟脯氨酸、羟赖氨酸是组成蛋白质的不常见氨基酸。非蛋白质氨基酸：瓜氨酸、鸟氨酸不组成蛋白质。 𐟓Œ 考点四：氨基酸的酸碱化学名词解释：氨基酸、蛋白质的等电点。填空题：中性、碱性、酸性氨基酸的等电点计算；判断pH大于pI时，氨基酸带负电，向正极移动；pH等于pI时，不带电，不移动；pH小于pI时，带正电，向负极移动。

磺基水杨酸法：测蛋白秘诀 𐟔 磺基水杨酸法（SSA），也被称为磺柳酸法，是一种测定蛋白质浓度的经典方法。蛋白质在酸性环境中带正电荷，而磺基水杨酸根带负电。在略低于蛋白质等电点的酸性环境下，磺基水杨酸根离子与蛋白质氨基酸阳离子结合，形成不溶性蛋白盐而沉淀，判定为阳性。沉淀的量或者溶液反应后的浑浊程度，可以反映蛋白质的含量，是尿液蛋白质的定性或者半定量检查方法。 𐟌Ÿ 优点：反应灵敏、操作简便、结果显示快能够与多种蛋白质（如白蛋白、糖蛋白、球蛋白和本周蛋白等）发生反应特别适合基层检验科尿液蛋白的复检方法 𐟚렧𜺧‚𙯼š 准确性较低高剂量的青霉素、高浓度尿酸或尿酸盐可能会使结果产生假阳性样本蛋白浓度过高或过低对测定结果均有影响 𐟓Š 步骤：使用比浊计或分光光度计测量样品的浊度根据标准曲线计算蛋白质浓度 𐟔젦�𓕥𘸧”覝妣€测微量人体蛋白，如尿液、脑脊液等是否有蛋白渗漏。该方法的敏感度达到50mg/L，因而有一定的假阳性。

𐟧쨛‹白质等电点测定实验揭秘𐟔 𐟔즎⧴⨛‹白质的神秘世界，从等电点测定开始！在这个实验中，我们将一探究竟，了解蛋白质在特定pH值下的溶解状态。 𐟒᥮ž验原理很简单：蛋白质在等电点时，溶解度最小，最易生成沉淀。通过调节溶液的pH值，我们可以观察到这一现象，并记录下来。 𐟓实验步骤如下： 1️⃣ 准备实验材料，包括试管、胶头滴管等。 2️⃣ 准确称取一定量的蛋白质样品。 3️⃣ 在试管中加入适量的缓冲液和蛋白质样品。 4️⃣ 用胶头滴管滴加酸碱指示剂，并记录溶液的pH值。 5️⃣ 混合均匀后，静置几分钟，观察溶液的变化。 𐟔实验结果与分析：通过观察溶液的变化，我们可以发现，在某个特定的pH值下，蛋白质溶解度最小，最易生成沉淀。这个pH值就是蛋白质的等电点。这个实验不仅让我们了解了蛋白质的溶解特性，还为我们提供了关于蛋白质结构的重要线索。 𐟒ᨮ訮𚯼š 蛋白质的等电点测定对于研究蛋白质的结构和功能具有重要意义。通过调节溶液的pH值，我们可以更好地理解蛋白质的稳定性和相互作用。这个实验为我们打开了一个探索蛋白质世界的新窗口！

蛋白质保存方法大揭秘！你知道多少？𐟧 蛋白质的保存方法多种多样，但你知道哪些是关键吗？让我们一起来看看吧！ 𐟧Š 低温保存法蛋白质对温度非常敏感，温度越高，它的稳定性就越差。因此，低温保存蛋白质溶液通常是最佳选择。一般来说，蛋白质越纯，它的稳定性就越差。特别是酶溶液，对热非常不稳定（少数酶如核糖酸酶和某些高温细菌产生的耐热性酶除外）。多数酶在35℃到40℃以上就会失活，难以长期保存。在普通冰箱中，通常只能保存一周左右。因此，液态蛋白质样品最好在-5℃到-10℃甚至-20℃以下冰冻保存，有时数月或数年后仍能保留大部分活性。 ⚠️ 冰冻再融解的注意事项虽然低温能增加蛋白质的稳定性，但并非温度越低越好。例如，羧肽酶、脂蛋白和某些抗体在冰冻再融解后可能会变性破坏。而某些酶在冻融后，活性反而增加，可能是因为酶颗粒结构松散，表面积增大，暴露出更多活性基团的缘故。反复冰冻和融化通常会导致蛋白质变性，应尽量避免。为了防止冻融损伤，冰冻保存要求样品浓度大、体积小、表面积大、含盐低、冻结迅速、-70℃以下保存、用时迅速融化等。 𐟌᯸ 稳定pH下的保存多数蛋白质在很狭窄的pH范围内才稳定，超出此范围即迅速变性。例如，鲸肌红蛋白在等电点pH6.8附近时稳定，卵类粘蛋白在中、酸性条件下对热稳定。蛋白质稳定存在的pH一般是等电点。因此，酸性、中性和碱性蛋白酶的稳定pH分别为pH2～pH6、pH6～pH9和pH5～pH10.5。但也有例外，如血浆蛋白质的等电点pH4.6，而其稳定pH为6.8，稳定pH与其等电点并不相同。酶的稳定pH也并非是酶反应的最适pH，二者有时可相差1至数个pH单位。所以保存液态蛋白质样品时，应小心调到其稳定pH范围内。通过这些方法，你可以更好地保存蛋白质样品，避免不必要的损失和浪费。希望这些信息对你有所帮助！

𐟔짗…理学小课堂：HE染色法的奥秘𐟌ˆ 𐟌𑦊€术原理细胞核染色：苏木精是一种碱性天然染料，它能使细胞核着色。细胞核内的染色质主要由DNA组成，DNA的双螺旋结构中，磷酸基向外，使DNA带负电荷，呈酸性，容易与带正电荷的苏木精结合。苏木精在碱性溶液中呈蓝色，因此细胞核被染成蓝色。细胞浆染色：细胞浆的主要成分是蛋白质，它是一种两性化合物。细胞浆的染色与pH值有关。当pH调到蛋白质的等电点（4.7-5.0）时，胞浆对外不显电性，此时酸或碱性染料不易染色。当pH调到6.7-6.8时，大于蛋白质的等电点pH值，表现酸性电离，而带负电荷的阴离子，可被带正电荷的染料染色。伊红Y是一种酸性染料，在水中离解成带负电荷的阴离子，与蛋白质的氨基正电荷结合，使细胞浆染色。细胞浆、红细胞、肌肉、结缔组织等被染成红色或粉红色，与蓝色的细胞核形成鲜明对比。分化作用：染色后，用某些特定的溶液将组织过多结合的染色剂脱去，这个过程称为分化作用，所用的溶液称为分化液。在HE染色中用0.5%盐酸乙醇作为分化液，因酸能破坏苏木精的醌型结构，使组织与色素分离而褪色。经苏木精染色后，必须用0.5%盐酸乙醇分化，使细胞核过多结合的苏木精染料和细胞浆吸附的苏木精染料脱去，再进行伊红染色，才能保证细胞核与细胞浆染色的分明。返蓝作用：分化之后，苏木精在酸性条件下处于红色离子状态，呈红色，在碱性条件下处于蓝色离子状态，呈蓝色。组织切片经0.5%盐酸乙醇分化后呈红色或粉红色，故分化之后，立即用水除去组织切片上的酸而终止分化，再用弱碱性水（0.2%氨水）使苏木精染上的细胞核呈现蓝色，这个过程称为返蓝作用或蓝化作用。另外用自来水浸洗也可使细胞核返蓝，但所需时间较长。 𐟔쥮ž验步骤脱蜡至水苏木素染色伊红染色脱水封片显微镜镜检

𐟧ꥰ分子蛋白转膜不再难！ 𐟑‹科研小伙伴们，是不是对小分子蛋白的转膜感到头疼呢？别担心，这里有超实用的技巧帮你轻松搞定！ 1️⃣ 𐟎‰选对膜材是关键！对于小分子蛋白，0.2 PVDF膜或NC膜可能是更好的选择，因为它们的孔径更小，更易捕捉小分子蛋白。 2️⃣ 𐟓ˆ精细调整转移条件也很重要。如果条带模糊或看不到，可以适当降低转移电压，延长转移时间，让小分子有足够的时间“搬家”。 3️⃣ 𐟧ꧼ“冲液pH要匹配。蛋白质的等电点与缓冲液pH匹配度影响转移效率。试试pH 8.3-9.0的Tris-Glycine缓冲液或pH 10.5的CAPS缓冲液，更适合小分子蛋白。 4️⃣ 𐟒–温柔对待膜和凝胶。使用湿式转移避免机械损伤，确保膜与凝胶紧密接触，无气泡干扰。 5️⃣ 𐟔检测系统也要灵敏。选择灵敏度高的化学发光检测系统，并适当延长曝光时间，让条带更清晰。 6️⃣ 𐟌Ÿ做好每一步细节把控。从SDS-PAGE到转膜，再到封闭、孵育抗体，每一步都要细心操作，确保实验条件一致。 𐟒ꨀ心和细致是关键！先做预实验摸条件，如果第一次不成功，不要灰心，调整参数后再次尝试。希望这些小技巧能帮你攻克小分子蛋白转膜难关！加油！𐟒ꀀ

分子发现的两大策略：筛与猜 𐟔 经典问题：老师，我该如何找到一个分子呢？ 𐟒ᠧ햧•夸€：筛选 𐟒ᠧ햧•夺Œ：猜测 𐟒𐠦œ‰钱就筛，没钱就猜 𐟓ˆ 提出问题 - 收集样本 - 高通量检测 - 候选分子 𐟒Ž 有钱筛分子的策略：检测mRNA的叫表达谱芯片检测miRNA的叫做miRNA芯片测lncRNA的叫做lncRNA芯片 𐟓œ 二代测序（NGS）：next generation sequencing 𐟔젥䧥䚦•𐧔襈𐧚„技术是三种：芯片、测序、质谱 𐟓Š 芯片检测DNA及RNA是碱基互补配对原理 𐟓ˆ 芯片检测蛋白是抗体-抗原特异性结合原理 𐟔젦ŠŠ探针密密麻麻设计在芯片上，对目的标本的DNA或者RNA进行杂交，显示荧光。 𐟓ˆ 芯片还有一个名字（Microarry微阵列），这个就比较形象了。用人肉眼看不清楚的一个微小的反应体系检测。 𐟓œ 二代测序（NGS）：next generation sequencing = deep sequencing 𐟓œ 一代测序（Sanger 测序） 𐟒ᠥ𛺨𜚊简单的表达谱分析可以芯片非编码RNA建议测序 𐟔젨𔨨𐱯𜈍ass spectrum） 𐟓Š 分子量和等电点是蛋白质分子的特点 𐟔 蛋白质的身份证：质荷比（离子质量和带电荷比值） 𐟔젨𔨨𐱥𐱦˜累碌奈𗨺뤻𝨯的设备 𐟔 筛基因、选DNA、RNA还是蛋白质好呢？答案：RNA 𐟔 因为DNA离蛋白隔了一个环节，并且DNA是遗传水平上变化，大部分疾病的变化都是表观水平，DNA检测不到。蛋白是功能的执行单位，但是蛋白不稳定，有半衰期，不能被及时捕捉到，样品处理也要求太高。所以常规来说从转录水平比较好，上可追溯基因改变，下可跟踪蛋白。PCR引物要比抗体省钱得多，所以实践中mRNA筛选更经济。

蛋白质的理化性质详解 𐟌𑊧Ÿ娯†点1: 蛋白质的高级结构蛋白质具有复杂的高级结构，这些结构使得它们拥有许多独特的理化性质。尽管蛋白质的一级结构是氨基酸，但它们还拥有更多由高级空间结构带来的特性。知识点2: 蛋白质的胶体性质蛋白质具有胶体性质，因为它们的直径在1到100nm之间。蛋白质能够吸附水分子，这是因为它们的结构基础是氨基酸，这些氨基酸带有氨基和羧基。氨基可以吸附氢离子，而羧基可以结合氢氧根离子，从而形成水分子，导致蛋白质表面形成水化膜。蛋白质的表面电荷为负电荷，这是因为大多数血浆蛋白的等电点在5.0左右，而血浆pH在7.35到7.45之间，因此pH大于PI时带负电荷。需要注意的是，赖氨酸带正电荷，因为它是一种碱性氨基酸，PI＞PH。知识点3: 蛋白质的变性变性是指将鸡蛋煮熟的过程，因为煮熟的鸡蛋变成固体，溶解度降低。变性后，蛋白质的粘度增加，这是因为蛋白质分解出许多游离的氨基酸，这些小分子相互摩擦导致黏度升高。结晶能力是生物学活性的一个指标，但煮熟后蛋白质的结晶能力消失，因为它们不再具有活性。吸光值会升高，因为变性过程中释放了许多芳香族氨基酸，吸光度因此增加。知识点4: 蛋白质的复性将鸡蛋液加入硫酸后，蛋白质变性形成絮状物。变性的蛋白质可以通过加热变成凝固状态，但凝固的蛋白质不一定发生了变性。加入硫酸的鸡蛋液煮熟后，蛋白质仍然会凝固。变性的蛋白质很容易发生沉淀，因为鸡蛋液加入硫酸后已经有絮状物出现。蛋白质沉淀不一定是由变性导致的，用钠盐中和蛋白质表面的负电荷也会发生沉淀。沉淀的蛋白质不一定发生了凝固性坏死，而凝固的蛋白质一定是沉淀状态的蛋白质。

碱性染料真的是碱性的吗？𐟤” 你有没有想过，我们高中生物课上见到的那些碱性染料，比如甲紫溶液（也叫龙胆紫溶液）、醋酸洋红溶液，还有改良的苯酚品红溶液，它们真的都是碱性的吗？其实，答案并不简单。什么是碱性染料？𐟧 首先，我们要知道什么是碱性染料。简单来说，染料必须有两个基本条件：一是要有颜色，二是要和被染的组织有亲和力。这种亲和力来自于染料中的发色基团和助色基团。发色基团让染料显示颜色，而助色基团则让染料和被染组织产生亲和力。酸性还是碱性？𐟤𗢀♂️ 那么，碱性染料的界定并不是由染料溶液的pH值决定的，而是由染料中的助色基团在水中电离后所带的电荷决定的。换句话说，碱性染料的pH值不一定大于7。一般来说，电离后助色基团带正电荷（阳离子）的染料就是碱性染料，反之则是酸性染料。如何工作的？𐟔슊例如，龙胆紫、亚甲基蓝、美蓝等碱性染料，它们通常能电离出有色的阳离子。这些阳离子可以和细胞中带负电荷的部分牢固地结合，比如细胞核中的染色质（含有脱氧核糖核酸，属酸性物质），从而被染上颜色。酸性染料呢？𐟒‰ 酸性染料则一般能溶于水和酒精，通常能电离出有色的阴离子。这些阴离子可以和细胞中带正电荷的部分牢固地结合，比如细胞质中某些常带正电荷的物质。 pH的影响𐟌᯸ 生物染料的染色作用还与溶液pH的变动有关。例如，鸡蛋白含有氨基和羧基，在酸性溶液中，当溶液的pH小于该蛋白质的等电点时，蛋白质带正电荷，易被酸性染料染色；在碱性溶液中，当溶液的pH大于该蛋白质的等电点时，蛋白质带负电荷，容易被碱性染料染色。总结𐟓 所以，碱性染料并不一定都是碱性的，它们的性质是由助色基团在水中电离后所带的电荷决定的。而且，染色效果不仅取决于染料的性质，还和溶液的pH有关。是不是觉得生物学真是个奇妙的世界呢？𐟌

生物信息学干货：蛋白理化及多序列比对技巧 𐟓Š 蛋白质分子量与等电点预测不同蛋白质的等电点各异。当缓冲液与等电点一致时，蛋白质会沉淀，影响酶促反应。因此，了解蛋白质的等电点至关重要。BioXM软件可进行此分析。 𐟔 蛋白N端信号肽分析信号肽含有疏水区，可能导致重组蛋白形成包涵体。在设计引物前，需先进行信号肽分析，并在信号肽断裂位点后的碱基端设计引物。注意：切除信号肽后要验证读码框是否改变，且质粒载体上带有启动子，无需考虑RNA聚合酶转录问题。 𐟔„ 多序列比对 GeneDoc软件支持两种算法（pairwise和multiple）进行多序列比对，具体操作流程见图3。输出结果为aln格式，可用Jalview可视化打开。 𐟌𑠃lustalX2多序列比对将多条序列依次输入text文件，保存为txt格式。ClustalX2支持多种比对格式，完成后得到树文件和aln文件，用Jalview打开aln文件即可。 𐟌🠍EGA-X多序列比对及进化树分析 MEGA-X支持多序列比对和进化树分析，完成后输出fasta格式和mega格式文件。构建进化树后，可点击小锤子进行美化。 𐟎蠅Spript可视化及二级结构预测 ESpript可用于多序列比对可视化和二级结构预测。将MEGA比对后格式和Swiss model建模文件导入ESpript，即可生成高质量配图。 𐟔 Motif预测详细见图示，了解如何进行motif预测。

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